使用方法（仅供参考）

1、染色液制备

1.1、配置DMSO或Ethanol储存液：储存液用DMSO或Ethanol配置浓度1～2 mM。

注：a、未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，可稳定保存6个月。

b、发现较难溶解时可以适当加热，并用超声处理以促进溶解。

c、必须保证所用溶剂新鲜无水。

1.2、工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，配制浓度为1～5 μM的工作液。

注：工作液最终浓度建议根据不同细胞系和实验体系来优化。

2、悬浮细胞染色

2.1、加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×106/mL。

2.2、37℃孵育细胞2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以2 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

2.3、孵育结束，按1000～1500 rpm离心5 min。

2.4、倾倒上清液，再次缓慢加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

2.5、重复2.3，2.4步骤两次以上。

3、贴壁细胞的染色

3.1、将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

3.2、从培养基中移走盖玻片，吸走过量培养液，将盖玻片放在潮湿的环境中。

3.3、在盖玻片的一角加入100 μL的染料工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

3.4、37℃孵育细胞 2～20 min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20 min作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

3.5、吸干染料工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10 min，然后吸干培养基。

4. 显微镜检测

DiO染色可见绿色荧光。Ex/Em=484/501 nm，推荐滤光器 XF23-Omega, 31001-Chroma。

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  Description: 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiO) is a fluorescent lipophilic tracer with green fluorescence.
  Method: For cell staining (Transwell assay: Infuence of macrophages on VSMCs).
  1. RAW264.7 cells (1×10⁵) are plated into the upper chamber, and equal numbers of VSMCs are plated into the lower surface.
  2. After culturing at 37℃ and 5.0% CO₂ for 48 h, the RAW 264.7 upper chamber is first treated with 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (1 μM; 1 h).
  3. Wash cells for 3 times with culture medium and co-culture cells with VSMCs at 37℃ and 5.0% CO₂ for 48 h.
  4. Use a fluorescence microscope for image.
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  Description: 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (DiO) is a fluorescent lipophilic tracer with green fluorescence.
  Method: For dual fluorescent virus fusion assay.
  1. Stain cells with 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate (when co-staining with another dye using a ratio of 1:2 with final concentrations of 22 μM for another dye and 46 μM for 3,3'-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate) (1 h; room temperature).
  2. Filter labeled viruses through a 0.22 μM filter.
  3. Testing cells are incubated with dually labeled viruses at 4˚C for 1 h, then washed with ice cold PBS twice to remove the unbound viruses, followed by incubation with warm virus maintenance medium at 37˚C for 0 h, 0.5 h or 1 h.
  4. Cells are fixed in 4% paraformaldehyde, and permeabilized with 0.1% Triton X-100 for 10 min. Images are acquired by Leica TCS SP5 inverted microscope (Leica Microsystems).

*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（参考来源于公开文献）

例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的K_m系数（3），再除以大鼠的K_m系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。

生物活性

DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染料是一族亲脂性的荧光染料，可以用来染细胞膜和其它脂溶性生物结构。当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强，这类染料有着很高的淬灭常数和激发态寿命。一旦对细胞染色，这类染料在整个细胞膜上扩散，最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。它们的荧光颜色区分明显：DiI(橙色荧光)，DiO(绿色荧光)，DiD(红色荧光)和 DiR (深红色荧光)这使得他们可以用来对活细胞进行多色成像和流式分析。DiI和DiO可以分别用标准的 FITC和TRITC的滤光片。DiO被激发后 可以发出绿色的荧光，其中最大激发波长为484nm，最大发射波长为501nm。用于细胞膜荧光标记时，DiO的常用浓度为1-30μM，最常用的浓度为5-10μM。DiO可以直接染色活的细胞或组织，染色时间通常为5-20分钟。对于固定的细胞或组织，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚甲醛进行固定，使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。

储存条件:    -20°C       

运输方式:    冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。