IKKβ

与接受载体的动物相比，缺血前海湾65-1942的递送显着降低了左心室梗塞面积。与假动物相比，接受载体的动物的梗塞 - 风险区域（AAR）比率显着增加（70.7±3.4对5.8±3.4％，P <0.05）。在每个时间点用Bay 65-1942治疗显着降低该比率（缺血前42.7±4.1％，再灌注42.7±7.5％，再灌注2小时29.4±5.2％;各组P <0.05与载体相比） 。用Bay 65-1942预处理的动物（n = 3）与IR之前未处理的动物相比，CK-MB水平显着减弱（14,170±3,219单位，与载体相比P <0.05）。

MEK（AZD6244）和IKK（BAY 65-1942）的抑制剂以其IC 50浓度使用，通过48小时MTS测定法测定，其实现对激酶活性的充分抑制。用相同浓度的AZD6244（5μM），BAY 65-1942（10μM）或这些抑制剂的组合处理MYL-R细胞24小时。 AZD6244和BAY 65-1942在剂量组合（5μMAAZD244+10μMBAY65-1942）下显示出对细胞活力的协同抑制，其与IC75相关（CI = 0.48±0.01）。在软件报告的IC50（CI = 0.56±0.09）和IC90（CI = 0.46±0.02）剂量组合中也表明协同作用（CI值是三次独立实验的平均值，±标准偏差）。与DMSO处理的细胞相比，AZD6244和BAY 65-1942处理分别诱导2倍和1.3倍半胱天冬酶3/7活化。使用AZD6244和BAY 65-1942的组合治疗导致胱天蛋白酶3/7活性增加3.2倍。

通过在96孔板上以4×10 4细胞/孔在补充有激酶抑制剂的100μLRPMI生长培养基中接种MYL-R细胞来测定细胞活力。生长培养基和激酶抑制剂在24小时和48小时补充。向每个孔中加入20μLMTS测定试剂。将平板返回培养箱约1小时，记录490nm处的吸光度。对于组合指数（CI）实验，培养细胞并测定。为了确定AZD6244和BAY 65-1942（10μM）剂量效应，将细胞用各种药物的一系列三倍稀释液单独或组合处理，同时分别保持1：2的恒定比例。分析细胞活力结果以得出CI值。来自三个独立实验的CI值被平均。

小鼠使用8-10周龄的雄性C57BL / 6小鼠。为了研究心肌IR损伤中的IKKβ抑制，使小鼠经历30分钟的心脏缺血，然后进行不同的再灌注期。在适当的给药时间点腹膜内注射Bay 65-1942（5mg / kg）。非治疗组接受含10％cremaphor水溶液的载体。在治疗组中，Bay 65-1942在缺血之前，再灌注时或再灌注损伤后2小时递送。在假手术，载体和每个治疗组的再灌注损伤后24小时测量梗塞面积。为了确认心肌损伤，在用Bay 65-1942预处理的动物中再灌注后1小时测量血清肌酸激酶 - 肌肉 - 脑水平分数（CK-MB）水平。