PPARγ

Inolitazone（RS5444）上调细胞周期激酶抑制剂p21 WAF1 / CIP1。沉默p21 WAF1 / CIP1使细胞对Inolitazone不敏感。 10nM剂量的Inolitazone激活PPARγ：RXRα依赖性转录，如利用与荧光素酶报告基因（PPRE3-tk-luc）融合的PPRE反应元件的瞬时转染测定中所证明的。在培养基中用指定浓度的Inolitazone，Rosiglitazone或Troglitazone处理DRO细胞。用PPRE3-tk-luc瞬时转染DRO细胞以检查EC50发生的有效浓度。 EC50为1nM（Inolitazone），65nM（罗格列酮）和631nM（曲格列酮）。类似地，计算的IC50抑制浓度对于Inolitazone为0.8nM，对罗格列酮为75nM，对于曲格列酮为1412nM。 Inolitazone特异性激活PPARγ，但不激活PPARα或PPARδ。瞬时转染10 nM Inolitazone后暴露于适当的PPAR同种型（γ，α或δ）和PPAR反应元件与RIE大鼠小肠细胞系中的荧光素酶报告基因连接，不会表达PPARs，只会产生增加的荧光素酶活性PPARγ和PPRE3-tk-luc的存在。 DRO细胞通过PPARγ依赖性机制被10nM Inolitazone（RS5444）抑制。

Inolitazone（RS5444）加紫杉醇在细胞培养中表现出额外的抗增殖活性，并且ATC肿瘤生长最小。当在DRO肿瘤细胞植入之前将Inolitazone在饮食中施用于无胸腺裸鼠时，以剂量响应方式抑制肿瘤生长。在最高剂量下，与对照相比，0.025％的Inolitazone在第32天抑制94.4％的生长。在该治疗组中，10只动物中的5只没有发展出明显的肿瘤。在0.0025％治疗组中，与对照相比，肿瘤生长在第32天被抑制62.3％，而0.00025％剂量与对照相比没有显示出生长抑制活性。在DRO或ARO肿瘤细胞植入后1周，允许在小鼠中建立肿瘤并开始0.025％Inolitazone治疗小鼠。在第35天，Inolitazone治疗的动物在DRO肿瘤中显示出68.9％的肿瘤生长抑制，在ARO肿瘤中显示48.3％的肿瘤生长抑制。

将DRO90-1（DRO）和ARO81（ARO）细胞以初始浓度2×10 4个细胞/孔接种于12孔培养板中，每种条件一式三份。孵育过夜后，用图中图例所示浓度的DMSO中稀释的Inolitazone，Rosiglitazone，Troglitazone，GW9662或紫杉醇处理细胞。所有细胞接受相同体积的DMSO，并用培养基暴露于每种药物6天，每48小时更换一次药物。 6天后，用PBS洗涤细胞，用胰蛋白酶消化并用Beckman Coulter Counter 计数。

*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（参考来源于公开文献）

例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的K_m系数（3），再除以大鼠的K_m系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。