GPR54 Angiogenesis

Kisspeptin-10（KP-10）在10μM时显着增加THP-1细胞对HUVEC的粘附10倍。用GPR54拮抗剂P234（20μM）预处理显着抑制Kisspeptin-10（10μM）诱导的THP-1细胞与HUVEC的粘附。这些结果表明Kisspeptin-10通过GPR54增加THP-1细胞与HUVEC的粘附。 Kisspeptin-10显着增强HUVEC中TNF-α，IL-6，MCP-1，ICAM-1，VCAM-1和E-选择蛋白的mRNA表达。 Kisspeptin-10显着增加HUVECs中ICAM-1和VCAM-1的蛋白表达，与mRNA水平的增加平行。

在两种不同的ApoE - / - 小鼠（C57 / B6和BALB / c）的动脉粥样硬化病变的发展中评价Kisspeptin-10（KP-10）和GPR54拮抗剂P234的作用。在ApoE - / - 小鼠（C57 / B6），主动脉粥样硬化病变的根（斑块大小）的（整个）表面和横截面积与五聚蛋白-3阳性区域，单核细胞/巨噬细胞浸润和VSMC含量为与13周龄相比，17周龄时血浆总胆固醇浓度显着增加。到17周龄时，与载体对照相比，输注高剂量Kisspeptin-10（12.5μg/ kg /小时）的小鼠血浆Kisspeptin-10浓度显着升高。高剂量的Kisspeptin-10（12.5μg/ kg /小时）显着增强主动脉粥样硬化病变区域和动脉粥样硬化斑块大小，五聚蛋白-3阳性区域和单核细胞/巨噬细胞浸润显着增加，VSMC含量显着降低。在17周龄的3组ApoE - / - 小鼠中，体重，食物摄入，收缩压和舒张压以及总胆固醇或葡萄糖的血浆浓度没有显着差异。注射Kisspeptin-10可以减缓小鼠的微血管皮肤血流量。使用基于GC / TOF-MS对大鼠的代谢组学研究，研究用Kisspeptin-10处理的大鼠中心脏代谢物的变化。代谢途径和生物标志物的鉴定可能有助于理解Kisspeptin-10治疗改变心脏功能的机制。通过透射电子显微镜（TEM）观察发生能量代谢的线粒体，并且可以从线粒体结构的变化推断能量代谢的扰动。关于血清样品的图中对照（N）和Kisspeptin-10（K）组之间存在明显的分离。

将第2代至第8代的HUVEC，HUVEC衍生的EA.hy926细胞或HASMC接种到96孔板（1×104细胞/100μL/孔）中，并在含有10％的DMEM或SmGM-2中孵育24小时或分别为5％FBS。然后将细胞与指定浓度的Kisspeptin-10在新鲜培养基中再孵育48小时。然后向每个孔中加入10微升WST-8溶液。孵育1小时后，使用Sunrise Remote R-micro读板器通过读取450nm处的吸光度来确定甲product产物的量。

小鼠使用总共66只雄性自发性高脂血症ApoE - / - 小鼠2株，C57 / B6（KOR / StmSlc-Apoeshl小鼠）和BALB / c（KOR / StmSlc-Apoeshl小鼠）。从13周龄开始，给小鼠喂食含有16.5％脂肪，1.25％胆固醇和0.5％胆酸钠的高胆固醇饮食。使用渗透性微型泵，用Kisspeptin-10和/或P234（GPR54拮抗剂）输注13周龄的小鼠4周。确定Kisspeptin-10和P234输注的时间进程和剂量。进行实验1以评估Kisspeptin-10对17只ApoE - / - 小鼠（C57BL / 6）的动脉粥样化形成的剂量依赖性作用。在13周龄时，将3只小鼠安乐死作为输注前对照。将剩余的14个分为3组，每组5个，4个和5个，然后分别以5和12.5μg/ kg /小时的剂量注入盐水（载体）或Kisspeptin-10。进行实验2以评估P234对38只ApoE - / - 小鼠（BALB / c）中Kisspeptin-10诱导的动脉粥样化形成的抑制作用。在13周龄时，在输注前将7只小鼠安乐死作为对照。其余31个分为3组，分别为10,10和11，然后注入生理盐水，Kisspeptin-10（12.5μg/ kg /小时）或Kisspeptin-10（12.5μg/ kg /小时）+ P234（50μg） / kg /小时），分别。进行实验3以评估P234对10只ApoE - / - 小鼠（BALB / c）中内源性Kisspeptin-10诱导的动脉粥样化形成（动脉粥样化形成的自然过程）的预防作用。在13至17周龄时，分别给5和5只小鼠注入生理盐水和P234（50μg/ kg /小时）。大鼠使用体重为200±20g的28周龄雄性Sprague-Dawley大鼠。它们保持在恒定温度（23±2℃）和湿度（45±15％），受控照明（12小时光暗12小时），并以标准饮食喂养，可自由饮用自来水。它们适应环境两周，以在动物实验开始前克服运输压力。然后，将所有大鼠随机分成两组。 Kisspeptin-10组每只大鼠每天皮下注射200μLKisspeptin-10（40 nmol /200μL），对照组每只大鼠每天皮下注射200μL生理盐水，两组均治疗7天。连续几天。用氨基甲酸乙酯（1.5g / kg，ip）麻醉大鼠。在全身麻醉下，收集血样并使大鼠安乐死。所有努力都是为了尽量减少动物的不适和压力。然后分析所有样品。七天后，在暴露于麻醉后将20只大鼠断头。收集心脏组织和血清样品并储存在-80℃直至用于总RNA和蛋白质提取以及代谢组学分析。其余的心脏组织用4％多聚甲醛和2.5％戊二醛在4℃下固定24小时，以进行进一步的形态学研究。