CYP1A1

Methysticin引发对CYP1A1最显着的诱导作用。与实验结果一致，基于芳烃受体（AhR） - 配体结合域同源性模型的计算机分子对接研究还揭示了与剩余的卡瓦内酯相比对甲基肌素的AhR的有利结合。此外，荧光素酶基因报告基因测定的结果表明，卡瓦提取物，Methysticin能够激活AhR信号传导途径。卡瓦提取物通过AhR依赖性机制诱导CYP1A1的表达，并且甲基心肌素有助于CYP1A1诱导。 CYP1A1的诱导表明卡瓦或卡瓦内酯与CYP1A1介导的化学致癌作用之间可能存在相互作用。 MTS细胞活力测定用于确定卡瓦提取物和卡瓦内酯对小鼠肝细胞中细胞活力的影响。用不同浓度的卡瓦提取物（0-50μg/ mL）和六种卡瓦内酯（0-100μM）处理Hepa1c1c7细胞24小时。结果表明，浓度高达50μg/ mL的卡瓦提取物和高达100μM的卡瓦内酯不会诱导细胞死亡。对于以下研究，使用0.78-6.25μg/ mL的卡瓦提取物和0.78-25μM的卡瓦内酯，其浓度不会对细胞造成损害。

通过口服强饲法将kavalactone Methysticin（6mg / kg）每周一次施用6个月至6个月大的转基因APP / Psen1小鼠。 Methysticin治疗激活小鼠海马和皮质中的Nrf2通路。与未处理的小鼠相比，甲基肌醇处理的APP / Psen1小鼠脑中的Aβ沉积没有改变。然而，Methysticin治疗显着减少了小神经胶质细胞增生，星形胶质细胞增生和促炎细胞因子TNF-α和IL-17A的分泌。 Methysticin处理导致海马和皮质中Nrf2 / ARE途径的显着激活，但ARE-荧光素酶报告基因小鼠的中脑和小脑中没有。与未处理的动物相比，Methysticin处理显着增加了两种基因的表达。

小鼠肝癌细胞系Hepa1c1c7和AhR缺陷细胞系CRL-2710在补充有10％FBS和抗生素（50U / mL青霉素和50μg/ mL链霉素）的α-MEM中生长，并在37℃下保持湿润。含5％二氧化碳的气氛。使用四唑鎓还原细胞活力测定（MTS）评估卡瓦提取物和卡瓦内酯（例如，甲基嘧啶; 0.195313,0.390625,0.78125,1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μM）的细胞毒性。处理24小时后，进行MTS测定。通过比较处理细胞的吸光度与DMSO对照的吸光度来计算细胞的活力。

小鼠在25周龄时开始处理转基因APP / Psen1小鼠（n = 6）并持续27周。每周一次用6mg / kg体重的Methysticin（0.15mg / 25g小鼠，相当于100μL工作溶液）处理动物。对照组由野生型小鼠（n = 6）和APP / Psen1小鼠（n = 6）组成，其用相同的治疗方案进行载体处理。在52周时，动物进行行为测试并随后进行安乐死。分离脑半球以获得用于石蜡包埋的福尔马林固定组织和用于来自相同动物的生化分析的组织。进一步解剖左半球以将海马与剩余的脑组织分开。将新鲜组织快速冷冻并立即储存在-80℃。为了在ARE-荧光素酶报告基因小鼠中诱导Nrf2 / ARE，小鼠一次接受6mg / kg体重的甲氧菌素。制备小鼠的海马，皮质，中脑和小脑，并在甲硫氨酸处理后6小时立即在液氮中快速冷冻。