tubulin

使用MTT测定检查翁布拉明（AVE8062）对内皮细胞或肿瘤细胞活力的影响。对于肿瘤细胞系（HeyA8，SKOV3ip1和HeyA8-MDR），Ombrabulin对小鼠肠系膜内皮细胞（MMEC）的IC50为10nM，范围在7和20nM之间。对于单独的每种药剂和组合的Ombrabulin /多西紫杉醇的剂量 - 反应曲线的非线性最小二乘回归的比较分析显示IC 50显着低于单独的任一种药剂（P <0.005，所有细胞系）。与单独的多西紫杉醇相比，多西紫杉醇对内皮细胞和肿瘤细胞的细胞毒性增加2至4倍。

在进行治疗实验之前，在裸鼠（每组n = 3）中通过iv，ip或sc途径每周两次测试各种剂量的翁布拉明（AVE8062）的耐受性，范围为10至100mg / kg。由于皮肤或尾静脉坏死的问题，不进一步追求iv和sc途径。 ip途径耐受良好，剂量高达100 mg / kg。接下来，进行初步实验以确定体内治疗功效的最低剂量。在肿瘤细胞注射后7天开始，用载体或翁布拉明10,30,50和100mg / kg腹膜内注射HeyA8卵巢癌细胞的裸鼠（每组n = 5），每周2次腹膜内注射，持续3周。与载体对照组相比，30mg / kg组的肿瘤重量减少65％（P <0.02）。 10mg / kg剂量无效。剂量> 30 mg / kg时的抗肿瘤作用并不明显;因此，选择30 mg / kg剂量用于后续治疗实验。

通过流式细胞术分析了Ombrabulin（AVE8062）调节MMEC和HeyA8细胞周期以及凋亡的能力。在所有测定中，将3x10 6个肿瘤细胞接种到培养皿中并使其粘附过夜。然后用PBS洗涤培养物，并用常规培养基（阴性对照）或含有多西紫杉醇，Ombrabulin（HeyA8,20nM; MMEC 10nM）或Ombrabulin加多西紫杉醇的培养基处理。对于细胞周期分析，通过胰蛋白酶消化收集肿瘤细胞，并与漂浮在培养基中的细胞合并。将细胞悬浮液在室温下以1,500rpm离心5分钟，然后洗涤并用乙醇固定。对于细胞凋亡分析，将细胞在室温下在50μLDNA标记溶液（10μL反应缓冲液，0.75μLTdT酶，8μLFITC-dUTP和32.25μL蒸馏水）中孵育过夜。加入漂洗缓冲液后，将样品离心，洗涤并在乙醇中固定。然后用PBS洗涤所有样品，然后在室温下将其重悬于PBS中的碘化丙锭（50μg/ mL）和RNase A（20μg/ mL）中30分钟。在EPICS XL流式细胞仪上分析染色细胞。低水平的门设置在G1峰的底部，细胞周期的G1和G2-M期内的细胞百分比通过Multicycle 分析确定。

*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（参考来源于公开文献）

例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的K_m系数（3），再除以大鼠的K_m系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。