Hoechst 工作液的配制

1.1 制备储存液

用 DMSO 配制 1 mg/mL 的 Hoechst 储存液。

注：Hoechst 储存液建议分装后于 -4℃ 或 -20℃ 避光保存。

1.2 工作液的配制

用预热好的无血清细胞培养基或 PBS 稀释储存液，终浓度为 10 μg/mL Hoechst 工作液。

注：请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度，且现用现配。

2. 细胞染色（悬浮细胞）

2.1 离心收集细胞，加入 PBS 洗涤两次，每次 5 分钟。细胞密度在 1×106/mL

2.2 加入 1 mL Hoechst 工作液，室温孵育 3-10 分钟。

2.3 400 g，离心 3-4 分钟，弃去上清。

2.4 加入 PBS 洗涤细胞两次，每次 5 分钟。

2.5 用 1 mL 无血清培养基或 PBS 重悬细胞后，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

3. 细胞染色（贴壁细胞）

3.1 将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

3.2 从培养基中移出盖玻片，吸除多余培养基。

3.3 加入 100 μL 染料工作液，轻轻晃动使其完全覆盖细胞，孵育 3-10 分钟。

3.4 吸去染料工作液，用培养基洗 2-3 次，每次 5 分钟，使用荧光显微镜或流式细胞仪进行观察。

注意事项

1. 请根据实际情况调整 Hoechst 工作液浓度。

2. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

Hoechst 33342使用方法（仅供参考）

1. 将1 mg/mL的Hoechst 33342用PBS或合适的缓冲液制备成10～50 μM Hoechst33342染色液。

2. 固定的细胞或组织染色：

对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色，则先进行免疫荧光染色，染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst33342染色。如果不需要进行其它染色，则直接进行后续的Hoechst 33342染色。

a）对于贴壁细胞或组织切片：加入适量Hoechst 33342染色液，覆盖住样品即可。对于悬浮细胞：至少加入待测染色样品体积3倍的染色液，混匀。室温放置3-5分钟。

b）吸除Hoechst 33342染色液，用TBST、PBS或生理盐水洗涤2-3次，每次3-5分钟。

c）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

3. 活细胞或组织染色：

a）细胞培养物中加入适量Hoechst 33342染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。

b）在 37℃培养细胞 10～20 分钟。

c）用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

d）直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长350 nm，发射波长460 nm。

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  Description: Hoechst 33342 trihydrochloride can be used for nuclei staining with blue fluorescence.
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  Description: Hoechst 33342 trihydrochloride can be used for nuclei staining with blue fluorescence to detect apoptosis.
  Method: For cell staining.
  1. Stain cells with Hoechst 33342 trihydrochloride (10 min).
  2. Use a fluorescence microscope (Nikon) to image.
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  Description: Hoechst 33342 trihydrochloride can be used to label chromatin with blue fluorescence.
  Method: For cell staining.
  1. Chromatin is briefly counterstained with Hoechst 33342 trihydrochloride (5 µg/mL) before imaging.
  2. Use a confocal microscope (Leica SP8) for image.

储备液配制

*下述溶液配置方法仅为基于分子量计算出的理论值。不同产品在配置溶液前，需考虑其在不同溶剂中的溶解度限制。

不同实验动物依据体表面积的等效剂量转换表（参考来源于公开文献）

例如，依据体表面积折算法，将化合物用于小鼠的剂量20 mg/kg 换算成大鼠的剂量，需要将20 mg/kg 乘以小鼠的Km系数（3），再除以大鼠的Km系数（6），得到化合物用于大鼠的等效剂量为10 mg/kg。

Hoechst 33342 trihydrochloride是可以膜透细胞膜，发蓝色荧光的 DNA 染料。Hoechst 通过结合 DNA 双链中的小沟而结合核酸。Hoechst 倾向于结合富含 A/T 的 DNA 链。同时，富含 A/T 的双链 DNA 使荧光强度显著增强。Hoechst 可穿过细胞膜，结合活细胞或固定细胞。Hoechst 染料的荧光强度随着溶液 pH 升高而增强。

*该产品在溶液状态不稳定，建议您现配现用

储存条件:    -20°C       

运输方式:    冰袋运输，根据产品的不同，可能会有相应调整。