Fluo 4-AM, 98%|Fluo 4-AM|cas:273221-67-3|西域试剂

Fluo 4-AM, 98%,Fluo 4-AM

产品编号：西域试剂-WR141739| CAS NO：273221-67-3| 分子式：C₅₁H₅₀F₂N₂O₂₃| 分子量：1096.94

本产品为Fluo-4,AM粉末状，用于细胞内钙离子检测时，Fluo-4, AM的常用浓度为0.5-5 μM。Fluo-4 AM是一种常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针 (λex=494 nm, λem=516 nm)。

本网站销售的所有产品仅用于工业应用或者科学研究等非医疗目的,不可用于人类或动物的临床诊断或者治疗,非药用,非食用，

货号	包装	价格	库存与货期	购买量	操作
西域试剂-WR141739		￥7589.00	杭州北京（现货）

增值税发票√顺丰快递√订货电话：18601927057

英文名称

Fluo 4-AM

CAS编号

273221-67-3

产品描述

外观性状

Solid

溶解性

DMSO

溶解性数据

操作方法（根据文献整理，仅供参考）

1）Fluo-4,AM母液的配制：向 Fluo-4, AM中加入适量DMSO，配制成1-5 mM的储存液，DMSO的加入量根据Fluo-4,AM（MW1096.94）分子量进行计算（如：若配制成1mM的母液，需向50 ug Fluo-4,AM中加入45.6 uL DMSO）。

【注】：溶解用的DMSO需要保证新鲜无水，否则将会导致 AM 体水解，使荧光染料无法进入细胞，影响实验效果。

2）Fluo-4,AM工作液的配制：利用HBSS将Fluo-4,AM稀释成1-5µM的工作液，具体稀释方法如1 mM母液配制1 mL浓度为4 µM工作液，用1 mL HBSS溶液稀释4 µL 1 mM母液即可。

【注】：①推荐该探针加载浓度在4-5 µM，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。

② Fluo-4,AM工作液需现配现用，避免反复冻存。
3）（可选）如果Fluo-4进入细胞的效果不好，可向 Fluo-4, AM/DMSO 溶液中加入适量20% Pluronic F127溶液，最终稀释至其终浓度为0.04-0.05%，Pluronic F127 可以防止 Fluo-4, AM 在 HBSS中聚合并能帮助其进入细胞。
【注】：Pluronic F127可降低Fluo-4,AM的稳定性，因此只建议在配制工作液时加入，不建议将其加入储存液长期保存。
4）取出预培养的细胞，除去培养基，使用 HBSS 溶液洗涤细胞 3次。
【注】：如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会分解 AM 体，从而降低 Fluo 4-AM 进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
5）将 Fluo-4, AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养10-60 min，然后除去 Fluo 4-AM 工作液。
【注】：关于孵育的时间，如果首次做实验不能确定，建议先孵育30分钟，看荧光效果：如果细胞死亡较多，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。
6）用HBSS溶液洗涤细胞 3 次，以充分去除残留的 Fluo 4-AM 工作液。然后加入 HBSS 溶液覆盖细胞。
7）37℃培养箱孵育约 20-30 分钟，以确保 AM 体在细胞内的完全去酯化作用。

8）用激光共聚焦或荧光显微镜检测细胞，激发波长 494 nm，发射波长 516 nm。

注意事项

1）荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2）Fluo-4,AM 容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底。
3）第一次使用时，建议母液即配即用。试剂溶解后尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
4）母液遇水极易分解，如果不能一次用完，建议分装保存，例如分装成5 μl/管，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
5）建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

体外研究

Fluo-4 AM 是一种荧光染料 (λex=494 nm，λem=516 nm)。预装 Fuo-4 AM，可以观察到非常明亮的荧光图像。在使用 fluo-3 AM 加载细胞进行的平行实验中，得到的荧光图像虽然在这种情况下清晰可辨，但不太亮。

指南 (以下是我们推荐的方案。本方案仅提供指南，应根据您的具体需要进行修改)。

1. 计数细胞，从每个样本 (对照和实验) 中取106个细胞。

2. 收集细胞 (5分钟，3000×g，4℃)，用PBS洗涤一次。

3. 用 0.5-ml PBS重悬细胞，加入 0.5 ul Fluo-4- AM (1 mM 库存) 至最终浓度为 1 μM。37℃ 孵育 1 小时。

4. 用 PBS 洗涤细胞 3 次 (2分钟，3000×g)，最后用 1 ml PBS重悬。分成 2 个流式细胞仪管，每管 0.5 ml。

5. 用流式细胞术评估染色，并用 CellQuest 软件等软件分析数据。

动物实验