细胞标记:
适用于正在发生凋亡的 HeLa 细胞和人外周血单个核细胞 (PBMC) (活的 HeLa 和 PBMC 不被 FITC-Dextran 染色)。
1. 43.5°C 孵育 1 h，37°C 孵育 8 h，诱导细胞凋亡。
2. 将细胞悬浮在 100 μL 的培养基中，在 Q-prep 管与 10 μL 的 propidium iodide (PI)，10 μL 的 FITC-Dextran (MW 4000) 混合，PI 和 FITC-Dextran (MW 4000) 的最终浓度分别为 7.5 μM 和 1.13 μM。
3. 将细胞在室温黑暗条件下培养 25 分钟。
4. 取 3 mL 培养基的标记细胞，500 g 离心 10 分钟。
5. 取离心细胞，加入 1 mL 培养基，用流式细胞术或荧光显微镜分析 (PI: Ex=500 nm, Em=600 nm; FITC-Dextran (MW 4000): Ex=495 nm, Em=525 nm)。

细胞旁渗透性检测
1. 在 transwell 室的基础培养基中加入 FITC-Dextran (0.1 mg/mL)。
2. 在 15 分钟后从 transwell 插入器中收集培养基。
3. 测量荧光信号 (Ex=485 nm, Em=538 nm)。
4. 根据荧光强度计算 FITC-Dextran 浓度。
5. 计算渗透率。

Guidelines (Following is our recommended protocol. This protocol only provides a guideline, and should be modified according to your specific needs).

肠屏障功能测定
1. 小鼠饥饿处理 4 小时。
2. FITC-Dextran MW 4000 灌胃小鼠 (0.6 mg/g)。
3. 在 4 h 内测量荧光强度 (Ex nm/Em 520 nm)。

FITC-Dextran 是一种由FITC偶联葡聚糖形成的标记物。

FITC-dextran灌胃测小鼠肠通透性具体实验步骤：

小鼠需断水断粮12小时（过夜）；

第二天，将FITC-葡聚糖溶于无菌生理盐水（125 g/L）中，按照50mg FITC-dextran/100g体重来灌胃；

4小时后，收集小鼠的血清，在96孔板上上样，注意需要设置空白孔，即没有灌FITC而是灌等量生理盐水的小鼠的血清；

随后用荧光酶标仪检测荧光值（激发波长490 nm，发射波长520 nm），并根据血清FITC-葡聚糖浓度校准曲线进行定量分析。